CROMATOGRAFÍA

Objetivos: 

• Aprendizaje de la técnica de cromatografía en capa fina y cromatografía en papel.
• Determinación de los componentes orgánicos presentes en una muestra.

Marco Teórico:

 

La cromatografía es un método físico de preparación para la caracterización de mezclas complejas, en el que se aplican técnicas basadas en el principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes.

Existen muchos tipos de técnicas para esta pero en todas ellas hay una fase móvil que consiste en un fluido que arrastra a la muestra a través de una fase estacionaria que se trata de un sólido o un líquido fijado en un sólido. 

Loa métodos cromatograficos que practicaremos son: 

1. Cromatografia en columna: La fase estacionaria solida se sitúa dentro de una columna. Según el fluido empleado como fase móvil liquida 

2. Cromatografia en papel: es un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar análisis cualitativos ya que pese a no ser una técnica muy potente no requiere de ningún tipo de equipamiento.

La fase estacionaria está constituida simplemente por una tira de papel de filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando pequeñas gotas de la solución y evaporando el disolvente. Luego el disolvente empleado como fase móvil se hace ascender por capilaridad. Esto es, se coloca la tira de papel verticalmente y con la muestra del lado de abajo dentro de un recipiente que contiene fase móvil en el fondo.

3. Cromatografia en capa delgada o en capa fina:  La fase estacionaria es una capa uniforme de un absorbente mantenido sobre una placa, la cual puede ser de vidrio, aluminio u otro soporte. Los requisitos son un absorbente( por ejemplo silica gel)), placas , un dispositivo que mantenga las placas durante la extensión, otro para aplicar la capa de absorbente, y una cámara en la que se desarrollen las placas cubiertas .

La fase móvil es líquida y la fase estacionaria consiste en un sólido. La fase estacionaria será un componente polar y el eluyente será por lo general menos polar que la fase estacionaria, de forma que los componentes que se desplacen con mayor velocidad serán los menos polares.

Materiales y Reactivos:

Eosina: piel: El material puede provocar una ligera irritación por contacto repetido o prolongado.

ingestion: Una dosis grande puede tener los siguientes efectos: diarrea. náusea.

vomito.

inhalacion: La exposición al polvo en altas concentraciones puede tener los siguientes efectos:- irritación de la nariz, garganta y las vías respiratorias. 

fluoresceina: Pueden ocurrir cefaleas, náuseas, vómitos, baja de la presión sanguínea y un dolor fuerte si la sustancia se extravasa.

sacarosa: Baja toxicidad. No son de esperar características peligrosas.

glucosa: sustancia no considerada como peligrosa. No tóxico, comestible.

ingestion: No produce efectos adversos bajo condiciones normales, pero

su ingestión puede desestabilizar personas con diabetes

ojos: Irritación de los ojos puede causar lagrimeo y enrojecimiento

 piel: Contacto con la piel puede producir una leve irritación

inhlacion: Aplica sólo en casos donde se produce un aerosol, puede causar irritación de la garganta y la nariz. 

Azul de metileno: La administración IV de altas dosis de azul de metileno (500 mg) causa náuseas, dolor abdominal y precordial, mareos, cefalea, sudoración profusa, confusión mental y metahemoglobinemia

Procedimiento: 

Cromatografía en papel: 

• Colocar el agua en el tubo utilizando una pipeta para evitar mojar las paredes. La cantidad de agua debe ser tal que apenas toque el borde inferior del papel.
• Empleando una micropipeta, colocar a 1 cm del borde inferior del papel, una gota de la mezcla por separar: (eosina, azul de metileno y fluoresceina)
• Se introduce el papel dentro del tubo. El tubo se puede sostener colocandolo dentro de un erlenmeyer.
• Esperar a que el disolvente se desplace hasta mas o menos 0.5cm por debajo del borde superior del papel.
• Sacar el papel, marcar con lápiz la distancia recorrida por el disolvente, dejarlo secar y calcular los Rr para cada una de las sustancias separadas 

Cromatografia en capa fina: 

• Emplear en un frasco con tapa y dos placas de vidrio que contengan el adsorbente (sílica gel).
• Colocar en el fondo del frasco, sin mojar las paredes una cantidad de disolvente, éter de petroleo-eter etílico tal que apenas toque el borde inferior de la capa. Tapar el frasco .
• Colocar con una micro-pipeta en una de las dos placas, dos de los siguientes fenoles: catecol (C), resorcina (R) o pirogarol (P). En la otra placa y de igual manera, colocar el fenol restante y una mezcla incógnita de dos fenoles (A), (B), O (D). Seguir cuidadosamente las instrucciones del asistente.
• Introducir con cuidado ambas placas en el frasco. Taparlo y esperar a que el disolvente se desplace hasta el extremo superior de las dos placas.